中药学论文_CCK-8与MTT法检测左归丸含药血清干

文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 实验动物:

    1.1.2 仪器与试剂:

1.2 方法

    1.2.1 ZGW冻干粉的制作:

    1.2.2 含药血清的制备:

    1.2.3 BMSCs的提取:

    1.2.4波长检测:

    1.2.5 灵敏度检测:

    1.2.6 孵育时间:

    1.2.7 生长曲线:

2 结果

2.1 最佳波长

2.2 灵敏度检测

2.3 孵育时间

2.4 增殖曲线

3 讨论

文章摘要:目的探讨CCK-8与MTT法在检测左归丸含药血清干预大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）增殖时所需的最佳实验条件,并比较两种方法的优缺点。方法用左归丸含药血清进行干预P3 BMSCs,孵育结束后,分别加入CCK-8与MTT试剂,检测两种方法的最佳波长、培养时间、灵敏度和增殖时间。结果CCK-8法与MTT法检测BMSCs的最佳波长分别为450 nm和550 nm,孵育时间分别为3 h和4 h,细胞接种密度分别为0.1×10⁴/孔和0.25×10⁴/孔。CCK-8法与MTT法在BMSCs接种密度分别高于0.25×10⁴/孔和0.5×10⁴/孔时,两种方法检测所得OD值均提早进入平台期,易出现假S型增长曲线。而当密度分别低于0.05×10⁴/孔和0.1×10⁴/孔时,细胞增加缓慢,难以形成S型增长曲线,不能反映出BMSCs的增殖特性。与CCK-8法相比较,在细胞密度低于0.1×10⁴/孔或高于2×10⁴/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量无明显变化,差异无统计学意义。而细胞密度为0.25×10⁴/孔至1×10⁴/孔时,MTT法对BMSCs在翻倍时OD值增加的响应量明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。结论MTT法更适用于左归丸含药血清干预BMSCs增殖和分化的研究。

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